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人脂联素定量 ELISA 试剂盒 说明书
               脂联素在肥胖症患者和II型糖尿病患者血清中的浓度明显低于非肥胖者，其浓度的降低导致了胰岛素抵抗和高胰岛素血症，而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用，因此脂联素与肥胖患者II型糖尿病及冠心病的发生发展密切相关,即脂联素的明显降低预示着II型糖尿病及冠心病的发生明显增加。在国外脂联素是近二年肥胖症的研究的一大热点。本试剂盒采用双抗夹心法测定人血浆或
血清中的脂联素，包被抗体及检测抗体采用鼠抗人脂联素单克隆抗体，用生物素、亲和素辣根酶标记检测系统，测定人血清或血浆中的脂联素。

试剂组成

1．预包被板12x8孔                                                            6．酶结合物 12mlx1
2．样品液40mlx2                                                            7．显色液 A 6.5mlx1
3．标准品A3ngx1                                                         8． 显色液 B 6.5mlx1
4． 10x 清洗液30mlx2(用前加蒸馏水270mlx2)                     9． 终止液 12mlx1
5．检测抗体12mlx1                                                         10．说明书1 份


操作程序

(恒温箱温育，微孔板直接放入箱内；水浴锅温育，微孔板放入温育盒内，盒内温度应
达 37℃)
1． 标本：待测定的血标本，应立即离心分离出血浆(EDTA 或肝素抗凝)或血清，测定前存于-80℃。
2． 取出与待测定样品相应量的板孔标记。其余板放回装有干燥剂的原包装袋里。
3． 标本稀释：取待测标本 10ul+样品液 90ul 混匀（样品 I），取样品 I10ul+样品液90ul混匀（样品Ⅱ），取样品II 10ul+样品液 490ul 混匀（样品Ⅲ）。
4． 标准品配制：取标准品 1 支加入 500ul 样品液,混匀（A：6ng/ml），取 1ml小离心管7支（B、C、D、E、F、G、H），分别加入 250ul 样品液，H 管为零对照管，从A 管吸取 250ul加入B管，混匀（B：3ng/ml）依次倍比稀释至G管（C：1.5ng/ml,D：0.75ng/ml，E：0.38ng/ml，F：0.19ng/ml,G：0.10ng/ml）
5． 加样：每孔加 100ul 已 1;5000稀释的样品Ⅲ，各标准品每孔加100ul，做复孔，空白孔不加样，37℃1.5小时。
6． 洗板：300ul/孔 1x 清洗液,甩去,在干净的吸水纸上拍干。如此洗三遍。
7． 加检测抗体：100ul/孔，37℃1.5 小时。洗板同 6，洗三遍。
8． 加酶结合物：100ul/孔，37℃30 分钟。洗板同 6，洗四遍。
9． 显色：显色液 A 50ul/孔，显色液 B 50ul/孔（先加 A 液再加 B 液，不得先加 B液，也可等量的 A液与B液混合，100ul/孔），37℃ 20 分钟（从加 B 液算时间）。
10．终止：终止液 100ul/孔，按显色液加样顺序加样。
11. 测定 450nm 的 OD 值（用 OD540 或 570校正），减去空白孔。用OD值对已知浓度的标准品作图，测定样品浓度。样品脂联素的浓度应乘上样品的稀释倍数5000。样品若不在线性范围，可对稀释度进行调整。

技术指标

1. 灵敏度高，100pg/ml；
2. 特异性强，不与小鼠及其它动物源脂联素交叉；
3. 线性范围：100pg/ml – 6ng/ml，结果重复可靠。

注意事项

1. 样品及标准品稀释应准确。血样品应按传染性材料处理。
2. 稀释后的标准品若不能立即使用，应尽快放置在 4℃。稀释后的标准品仅供当天使用。
3. 洗板后应注意拍干，并应注意尽快加下一步的反应液。
4. 每板每次测定均需做标准曲线。
5. 不同操作人员、温育温度、温育时间、洗板、加样时间、标本稀释均对测定结果有影响。稀释加样时间不可太长。样品应备份。

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