REF 10-023
【用途】
TPAcyk 酶免试剂盒是一步法体外诊断试剂，可定量检测血清中细胞角蛋白8和18片断。试剂对肿瘤细胞活性反应敏感，可用于上皮组织来源的恶性肿瘤患者的治疗监测。
【实验原理】
TPAcyk 酶免试剂盒是基于免疫化学技术基础的一种固相三明治夹心法的试剂盒。在微孔板的孔中，标准液、质控、患者标本分别同时与固相捕捉抗体（6D7和3F3）反应，又在孵育中与HRP结合的示踪抗体相结合。洗板后加入TMB底物，然后终止反应，读光吸收值。所生成的颜色与被检测物的浓度成正比。
【特异性】
TPAcyk 酶免试剂盒与TPA （组织多肽抗原）片断的特异性决定簇反应，试剂盒中单克隆抗体6D7和3F3对细胞角蛋白8和18 是特异性的。与可能存在于患者标本中的其他肿瘤相关抗原无交叉反应。
【标本】
建议检测血清标本。一次检测所需要的采血量应能满足2x100uL的血清需要量（双孔）。如果检测能在24小时内完成，血清可置于2-8℃。如果检测超过此时限，血清标本需分量后冰冻于<-18℃。避免反复冻融。不宜检测溶血、高脂血或污染的标本。
【注意事项】
1． 本试剂盒仅供体外使用。
2． 可戴防护性手套和眼镜。
3． 不要使用过期试剂盒。
4． 不同批号试剂盒的试剂不宜混用。
5． 所有的病人标本应视为有传染性的，应按实验室相应规章制度进行处理。
6． 试剂应避免被微生物污染。
7． 实验操作应遵照合格实验室操作规程执行。
8． 实验的准确性与实验程序和加样的精确性有关。
9． 终止液含0.5M硫酸，对皮肤有刺激，对眼睛有伤害。万一眼睛接触了，首先用大量清水冲洗，再请医生治疗。
10.TMB底物对皮肤和眼睛有刺激。万一眼睛接触了，首先用大量清水冲洗，再请医生治疗。
11．本试剂盒中用ProClin300（60ppm）作为防腐剂，可能有致敏性。如果接触了，可用大量清水冲洗，再请医生治疗。
12. 根据客户需要，可以提供材料的安全数据。
【未提供的必需品】
酶标仪（波长450nm）
微孔板振荡器（振荡450rpm）
洗板装置
实验室常规仪器设备。例如：微量移液器，震荡器。
【TPAcyk酶免试剂盒内容】
供96人份使用。
微孔板：1块,96孔（12x8），由抗细胞角蛋白8/18单克隆抗体（6D7和3F3）包被。与干燥剂共同装入铝箔袋中备用。
HRP结合抗TPAcyk抗体：2瓶，0.5mL/瓶。HRP结合的抗TPAcyk单抗溶于稳定的蛋白缓冲液中，pH7.5(11xconc.)。使用前需要用TPAcyk稀释液（即标准液0ng/mL）稀释。液体为蓝色，已加防腐剂。
TPAcyk稀释液（即标准液0ng/mL）：1瓶，15mL,既是标本稀释液也是标准液0 ng/mL。为pH7.5稳定蛋白缓冲液，已加防腐剂，备用。
标准液：共5瓶，每瓶1mL，（1,2,5,10,15 ng/mL）。为稳定的TPAcyk蛋白缓冲液，pH7.5。各浓度值分别标在瓶签上。已加防腐剂,备用。
质控(低和高浓度)：2瓶，1mL/瓶，为冻干质控。去离子水溶解后的蛋白缓冲液pH7.5，液体呈黄色，已加防腐剂。
清洗液溶质片剂：1袋，1片/袋，用新鲜的去离子水500mL溶解。
TMB底物：1瓶，22mL，需避光密闭保存。应根据检测的需要量适量吸取，备用。
终止液：1瓶，12mL，0.5M硫酸，备用。
封闭纸：1张，封闭微孔板。
TPAcyk 酶免试剂盒产品合格证书：1张
【操作步骤】
实验操作应在室温（22±6℃）下进行。（见操作流程表）。
1. 实验操作前将所有试剂和标本恢复至室温，试剂用前振荡
2. 分别以新鲜的去离子水1.0mL配制质控，加入去离子水后摇动10分钟，然后静置15分钟后使用。
3. 根据所需要的微孔板条数用TPAcyk稀释液(5.0mL/瓶)稀释HRP结合的抗TPAcyk抗体（11xconc）。充分混匀。
4. 微孔中分别加入标准液、质控、患者标本100uL，应做双孔，留2个空白孔作背景对照。
5. 每孔即刻加入100uL稀释后的HRP-抗TPAcyk抗体，2个空白孔除外。用封闭纸封闭微孔板。注意：第4和第5步应连续进行。
6. 振荡孵育2小时±2分钟，震荡器450rpm。
7. 配制清洗液，将溶质片溶于500mL新鲜去离子水中。
8. 用清洗液洗板3次。
9. 每孔加入200uLTMB底物溶液，包括2个空白孔并避光孵育15±1分钟。
10. 每孔加入100uL终止液，振荡1分钟(450rpm)。
11. 加入终止液30分钟内在酶标仪450nm波长读光吸收值。
12. 计算标本的细胞角蛋白8/18片断的浓度值（ng/mL）.高于15 ng/mL的标本在重复检测前应用TPAcyk稀释液（标准液0ng/mL）做适当稀释。
操作流程表
制备HRP结合 TPAcyk抗体，每孔分别加入标准液/质控/病人标本各100uL（双孔） | → | 每孔加入稀释后的HRP结合TPAcyk抗体100uL | → | 室温下振荡孵育2小时 | → | 洗板 | → | 每孔加200uLTMB，避光孵育15分钟 | → | 每孔加100uL终止液，振荡1分钟，450nm读值 |
【结果的计算】
对于不能自动处理数据的酶标仪，可以用计算机软件计算处理（适宜于Spline smoothed曲线），处理的数据中应包括质控。
手工计算结果：
减去空白孔背景的光吸收值以纠正吸收值，计算出每对双孔的均值。点出每一标准液的平均吸收值（y轴）和其相对应的浓度值（x轴），连接成一条标准曲线。根据此标准曲线计算出未知的病人标本的浓度值。
【试剂的保存】
试剂盒应保存在2-8℃，不可以冷冻保存！一次实验未能用完的试剂，在原试剂瓶中保存。如果微孔板一次用不完，剩余的微孔板条装入铝箔袋封闭，包括干燥剂。2-8℃条件下，洗板液和稀释后的HRP结合的抗TPAcyk抗体、溶解后的质控可保存4周。
【实验的局限性】
本实验不适于肿瘤筛选。检测结果应和其他临床检查结果相结合分析。在某些妊娠妇女、肝脏疾患、肾功能衰竭和一般感染性疾病可见到浓度值增高的情况。如果怀疑有感染，可考虑两周后复检。
【实验特征】
检测范围：检测范围0-15ng/mL。500 ng/mL以下无倒钩效应。
可重复性：批内CV值﹤5%（双孔），批间CV值大约5-10%。
敏感性：TPA cyk酶免试剂盒最小检测限度为0.1 ng/mL，此结果来自标准液0 ng/mL光吸收值标准差的3倍。
参考值：1.0ng/mL，来自95百分数，标本来自瑞典健康献血者。由于实验室之间的差异，以及地区、人群、实验操作技术、对照组选择的不同，建议各实验室建立自己的正常参考值。
回收率：高浓度的TPAcyk加入人血清标本中，经检测回收率为88-98%。
【声明】
本说明书中提供的实验数据来自特定的实验程序，对本公司说明书中操作程序的任何修改都将影响检测结果。对此，本公司声明不负任何责任，包括本文说明的或未明示的产品性能与适用范围。
【参考文献】略
REF 10-023
【用途】
TPAcyk 酶免试剂盒是一步法体外诊断试剂，可定量检测血清中细胞角蛋白8和18片断。试剂对肿瘤细胞活性反应敏感，可用于上皮组织来源的恶性肿瘤患者的治疗监测。
【实验原理】
TPAcyk 酶免试剂盒是基于免疫化学技术基础的一种固相三明治夹心法的试剂盒。在微孔板的孔中，标准液、质控、患者标本分别同时与固相捕捉抗体（6D7和3F3）反应，又在孵育中与HRP结合的示踪抗体相结合。洗板后加入TMB底物，然后终止反应，读光吸收值。所生成的颜色与被检测物的浓度成正比。
【特异性】
TPAcyk 酶免试剂盒与TPA （组织多肽抗原）片断的特异性决定簇反应，试剂盒中单克隆抗体6D7和3F3对细胞角蛋白8和18 是特异性的。与可能存在于患者标本中的其他肿瘤相关抗原无交叉反应。
【标本】
建议检测血清标本。一次检测所需要的采血量应能满足2x100uL的血清需要量（双孔）。如果检测能在24小时内完成，血清可置于2-8℃。如果检测超过此时限，血清标本需分量后冰冻于<-18℃。避免反复冻融。不宜检测溶血、高脂血或污染的标本。
【注意事项】
1． 本试剂盒仅供体外使用。
2． 可戴防护性手套和眼镜。
3． 不要使用过期试剂盒。
4． 不同批号试剂盒的试剂不宜混用。
5． 所有的病人标本应视为有传染性的，应按实验室相应规章制度进行处理。
6． 试剂应避免被微生物污染。
7． 实验操作应遵照合格实验室操作规程执行。
8． 实验的准确性与实验程序和加样的精确性有关。
9． 终止液含0.5M硫酸，对皮肤有刺激，对眼睛有伤害。万一眼睛接触了，首先用大量清水冲洗，再请医生治疗。
10.TMB底物对皮肤和眼睛有刺激。万一眼睛接触了，首先用大量清水冲洗，再请医生治疗。
11．本试剂盒中用ProClin300（60ppm）作为防腐剂，可能有致敏性。如果接触了，可用大量清水冲洗，再请医生治疗。
12.根据客户需要，可以提供材料的安全数据。
【未提供的必需品】
酶标仪（波长450nm）
微孔板振荡器（振荡450rpm）
洗板装置
实验室常规仪器设备。例如：微量移液器，震荡器。
【TPAcyk 酶免试剂盒内容】
供96人份使用。
微孔板：1块,96孔（12x8），由抗细胞角蛋白8/18单克隆抗体（6D7和3F3）包被。与干燥剂共同装入铝箔袋中备用。
HRP结合抗TPAcyk抗体：2瓶，0.5mL/瓶。HRP结合的抗TPAcyk单抗溶于稳定的蛋白缓冲液中，pH7.5(11xconc.)。使用前需要用TPAcyk稀释液（即标准液0ng/mL）稀释。液体为蓝色，已加防腐剂。
TPAcyk稀释液（即标准液0ng/mL）：1瓶，15mL,既是标本稀释液也是标准液0 ng/mL。为pH7.5稳定蛋白缓冲液，已加防腐剂，备用。
标准液：共5瓶，每瓶1mL，（1,2,5,10,15 ng/mL）。为稳定的TPAcyk蛋白缓冲液，pH7.5。各浓度值分别标在瓶签上。已加防腐剂,备用。
质控(低和高浓度)：2瓶，1mL/瓶，为冻干质控。去离子水溶解后的蛋白缓冲液pH7.5，液体呈黄色，已加防腐剂。
清洗液溶质片剂：1袋，1片/袋，用新鲜的去离子水500mL溶解。
TMB底物：1瓶，22mL，需避光密闭保存。应根据检测的需要量适量吸取，备用。
终止液：1瓶，12mL，0.5M硫酸，备用。
封闭纸：1张，封闭微孔板。
TPAcyk 酶免试剂盒产品合格证书：1张
【操作步骤】
实验操作应在室温（22±6℃）下进行。（见操作流程表）。
1. 实验操作前将所有试剂和标本恢复至室温，试剂用前振荡
2. 分别以新鲜的去离子水1.0mL配制质控，加入去离子水后摇动10分钟，然后静置15分钟后使用。
3. 根据所需要的微孔板条数用TPAcyk稀释液(5.0mL/瓶)稀释HRP结合的抗TPAcyk抗体（11xconc）。充分混匀。
4. 微孔中分别加入标准液、质控、患者标本100uL，应做双孔，留2个空白孔作背景对照。
5. 每孔即刻加入100uL稀释后的HRP-抗TPAcyk抗体，2个空白孔除外。用封闭纸封闭微孔板。注意：第4和第5步应连续进行。
6. 振荡孵育2小时±2分钟，震荡器450rpm。
7. 配制清洗液，将溶质片溶于500mL新鲜去离子水中。
8. 用清洗液洗板3次。
9. 每孔加入200uL TMB底物溶液，包括2个空白孔并避光孵育15±1分钟。
10. 每孔加入100uL终止液，振荡1分钟(450rpm)。
11. 加入终止液30分钟内在酶标仪450nm波长读光吸收值。
12. 计算标本的细胞角蛋白8/18片断的浓度值（ng/mL）.高于15ng/mL的标本在重复检测前应用TPAcyk稀释液（标准液0ng/mL）做适当稀释。
操作流程表
制备HRP结合 TPAcyk抗体，每孔分别加入标准液/质控/病人标本各100uL（双孔） | → | 每孔加入稀释后的HRP结合TPAcyk抗体100uL | → | 室温下振荡孵育2小时 | → | 洗板 | → | 每孔加200uLTMB，避光孵育15分钟 | → | 每孔加100uL终止液，振荡1分钟，450nm读值 |
【结果的计算】
对于不能自动处理数据的酶标仪，可以用计算机软件计算处理（适宜于Splinesmoothed曲线），处理的数据中应包括质控。
手工计算结果：
减去空白孔背景的光吸收值以纠正吸收值，计算出每对双孔的均值。点出每一标准液的平均吸收值（y轴）和其相对应的浓度值（x轴），连接成一条标准曲线。根据此标准曲线计算出未知的病人标本的浓度值。
【试剂的保存】
试剂盒应保存在2-8℃，不可以冷冻保存！一次实验未能用完的试剂，在原试剂瓶中保存。如果微孔板一次用不完，剩余的微孔板条装入铝箔袋封闭，包括干燥剂。2-8℃条件下，洗板液和稀释后的HRP结合的抗TPAcyk抗体、溶解后的质控可保存4周。
【实验的局限性】
本实验不适于肿瘤筛选。检测结果应和其他临床检查结果相结合分析。在某些妊娠妇女、肝脏疾患、肾功能衰竭和一般感染性疾病可见到浓度值增高的情况。如果怀疑有感染，可考虑两周后复检。
【实验特征】
检测范围：检测范围0-15ng/mL。500ng/mL以下无倒钩效应。
可重复性：批内CV值﹤5%（双孔），批间CV值大约5-10%。
敏感性：TPAcyk 酶免试剂盒最小检测限度为0.1ng/mL，此结果来自标准液0ng/mL光吸收值标准差的3倍。
参考值：1.0ng/mL，来自95百分数，标本来自瑞典健康献血者。由于实验室之间的差异，以及地区、人群、实验操作技术、对照组选择的不同，建议各实验室建立自己的正常参考值。
回收率：高浓度的TPAcyk加入人血清标本中，经检测回收率为88-98%。
【声明】
本说明书中提供的实验数据来自特定的实验程序，对本公司说明书中操作程序的任何修改都将影响检测结果。对此，本公司声明不负任何责任，包括本文说明的或未明示的产品性能与适用范围。
【参考文献】略