1. 粉末培养基配制:
1.1 说明:
1.1.1 若培养基以碳酸氢钠(sodiumbicarbonate)为pH缓冲系统,则需另外添加碳酸氢钠至培养基中。配制时若将碳酸氢钠粉末直接加入培养基中,容易造成pH之误差,或局部过碱。因此建议粉末培养基及碳酸氢钠粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(例如HCl)或强碱(例如NaOH)。
1.1.2 细胞培养基除了以碳酸氢钠为pH缓冲系统,亦可使用其他缓冲物质,配制此类培养基则不须添加碳酸氢钠亦不须使用CO2气体调整pH。
1.2 材料:
1.2.1 纯水(milli-Q 水或二次至三次蒸馏水,水品质非常重要)
1.2.2 粉末培养基
1.2.3 碳酸氢钠(sodium bicarbonate)
1.2.4 电磁搅拌器
1.2.5 无菌玻璃瓶
1.2.6 0.1或0.2 μm无菌过滤膜
1.2.7 pH meter
1.2.8 真空帮浦
1.2.9 CO2钢瓶
1.3 步骤(以1升为例):
1.3.1 细胞培养基通常须添加10%血清,为预留此体积,因此粉末培养基之配制体积为900ml。
1.3.2 取粉末培养基溶於700ml milli-Q水中,搅拌使其溶解。
1.3.3 称取1.5 g/L之碳酸氢钠粉末(一般最终浓度為1.5g/L,但若有特殊浓度,则依该培养基之需求而加入适当之碳酸氢钠)溶于200mlmilli-Q水中,搅拌使其溶解,然后通入CO2气体至饱和,约10-30秒。
1.3.4 将溶解且含饱和CO2之碳酸氢钠溶液加入溶解之液体培养基中混合。混合后溶液之pH应为7.2-7.4,除非pH值偏差太大,否则不需用酸碱再调整之。若为太碱,可再通入CO2气体调整pH。过滤后,一般pH会上升0.1左右。
1.3.5 以0.1或0.2μm无菌过滤膜过滤培养基,并分装至已标示之无菌玻璃瓶中,贮存于4℃(血清亦可加入培养基中一起过滤)。
1.3.6 培养基标签应标示培养基种类、厂牌、货号(catalognumber)、批号(lotnumber)、配制日期与瓶号。
1.3.7 取样培养基测试其pH及渗透压,并检测生物污染。
1.3.8 细胞培养基应置于2~8℃避光保存。若出现沉淀或过期,则应捨弃不用。实验进行前放在37℃水槽中温热后才使用之。