1. 前言:
1.1 冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶对细胞造成伤害。
1.2 细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢復正常﹙例如產生单株抗体或是其他蛋白质﹚。
2. 材料:
2.1 恒温水槽
2.2 新鲜培养基
2.3 无菌吸管 / 离心管 / 培养瓶
2.4 液氮或乾冰容器
3. 步骤:
3.1 将新鲜培养基置于 37°C 水槽中回温(或其他适当之培养温度),回温后以 70%ethanol擦拭之,移入无菌操作台内。
3.2 操作人员应戴防护面罩及手套,自液氮或乾冰容器中取出冷冻管,防止冷冻管可能爆裂之伤害。
3.3 取出冷冻管,立即放入 37°C 水槽(或其他适当之培养温度)中快速解冻,轻摇冷冻管使其在 1~3分钟内全部融化,以 70% ethanol 擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。
3.4 依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取适量培养基加至适当之培养瓶中,缓慢加入已解冻之细胞悬浮液(一般稀释比例為1:10~1:15), 与培养基混合均匀后,放入培养箱培养。可另取样少许解冻细胞悬浮液作存活测试。
3.5 解冻后是否立即去除冷冻保护剂 (例如 DMSO 或glycerol),依细胞种类而异。对大多数细胞株而言,不需要立即去除冷冻保护剂。若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5~10ml 培养基之离心管内,离心 1,000 rpm、5分鐘后,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入培养瓶内,置于适当之培养箱培养。
3.6 若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养隔日后更换培养基即可。