1.前言：
1.1细胞生长至高密度时，即须收集细胞，分殖至新的培养瓶中，其稀释比例依细胞种类而异。
1.2收集细胞方法可用trypsin-EDTA、cell scraper、离心处理等，处理方法依细胞种类而异。
1.3Trypsin-EDTA为收集吸附型细胞常用之方法。Trypsin为胰蛋白酵素，其作用为分解细胞与瓶壁之附著蛋白，EDTA为chelatingagent，其作用为去除Ca2+、Mg2+等离子，trypsin与EDTA二者共同作用，可使附著之细胞自瓶壁脱落。除了trypsin-EDTA，亦可使用cell scraper(细胞刮勺)刮落细胞。
1.4Trypsin-EDTA作用时间勿太久，否则可能对细胞造成伤害或死亡。敲拍培养瓶不可太过猛烈，避免对细胞造成伤害或造成培养瓶裂痕而污染。
2.材料：
2.1Dulbecco's phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free
2.2trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4Na)：若为大体积包装，建议将其以少量分装于无菌试管中，保存于-20℃，避免反覆冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。使用前放在37℃水槽中回温。
2.3新鲜培养基
2.4无菌吸管/离心管/培养瓶
3.步骤：
3.1附著型细胞(adherent cell)
3.1.1吸掉旧培养液。
3.1.2用Dulbecco's phosphate-buffered saline洗涤细胞一至二次。
3.1.3加入trypsin-EDTA溶液(1ml/T-25 flask, 2ml/T-75 flask)：
3.1.3.1方法一：37℃或室温作用数分钟，於倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液，轻敲培养瓶边缘使细胞自瓶壁脱落，然后加入适量之新鲜培养基，与脱落之细胞或细胞团块混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。
3.1.3.2方法二：37℃或室温作用数分钟，待细胞自瓶壁脱落后，加入适量含血清之新鲜培养基，以终止trypsin作用﹙因血清中含有trypsininhibitor，可以终止trypsin作用﹚，离心后去除上清液，或不作离心处理，添加新鲜培养基后依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。
3.2悬浮型细胞(suspension cell)
3.2.1吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm、 5分钟。
3.2.2吸除上清液，加入适量之新鲜培养基，与沉淀细胞(cellpellet)混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养。
3.3融合瘤﹙hybridoma﹚
3.3.1有些hybridomacell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。